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小鼠胚胎成纖維細(xì)胞傳代培養(yǎng)
  • 發(fā)布日期:2022-05-23      瀏覽次數(shù):722
    • 小鼠胚胎成纖維細(xì)胞傳代培養(yǎng):
      一、原理 

        細(xì)胞在培養(yǎng)瓶長成致密單層后,已基本上飽和,為使細(xì)胞能繼續(xù)生長,同時也將細(xì)胞數(shù)量擴(kuò)大,就必須進(jìn)行傳代(再培養(yǎng))。   傳代培養(yǎng)也是一種將細(xì)胞種保存下去的方法。同時也是利用培養(yǎng)細(xì)胞進(jìn)行各種實驗的必經(jīng)過程。懸浮型細(xì)胞直接分瓶就可以,而貼壁細(xì)胞需經(jīng)消化后才能分   瓶。   
      二、材料和試劑   

      1、細(xì)胞:貼壁細(xì)胞株   

      2、試劑:0.25%、1640培養(yǎng)基(含10%小牛血清)   

      3、儀器和器材:倒置顯微鏡,培養(yǎng)箱、培養(yǎng)瓶、吸管、廢液缸等  
      三、操作步驟  

       1、將長滿細(xì)胞的培養(yǎng)瓶中原來的培養(yǎng)液棄去。   

      2、加入0.5—1ml 0.25%溶液,使瓶底細(xì)胞都浸入溶液中。  

       3、瓶口塞好橡皮塞,放在倒置鏡下觀察細(xì)胞。隨著時間的推移,原貼壁的細(xì)胞逐漸趨于圓形,在還未漂起時將棄去,加入10ml培養(yǎng)液終止消化。 觀察消化也可以用肉眼,當(dāng)見到瓶底發(fā)白并出現(xiàn)細(xì)針孔空隙時終止消化。一般室溫消化時間約為1—3分鐘。   

      4、用吸管將貼壁的細(xì)胞吹打成懸液,分到另外兩到三瓶中,實踐培養(yǎng)液塞好橡皮塞,置37下繼續(xù)培養(yǎng)。第二天觀察貼壁生長情況。   

      附:消化液配制方法:   稱取0.25克蛋白酶(活力為1250),加入100mlCa2+Mg2+Hank’s液溶解,濾器過濾除菌,4保存,用前可在37下回溫。   溶液中也可加入EDTA,使zui終濃度達(dá)0.02%

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