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抗體的制備概述
  • 發(fā)布日期:2025-01-20      瀏覽次數(shù):39
    • 1、多克隆抗體的制備:

      ①免疫方法:對多克隆抗體,免疫方法一般有皮下或肌肉免疫法、皮內(nèi)免疫法、淋巴結(jié)免疫法和混合法等。一般來說,皮下或肌肉免疫法產(chǎn)生的抗體比較多;皮內(nèi)免疫法所需的抗原量少,在抗原寶貴時(shí)特別適用,但與之相對的,它產(chǎn)生的抗體量也不多?;旌厦庖叻ǖ膬?yōu)點(diǎn)是抗原用量小,產(chǎn)生抗體速度快。

      ②多克隆抗體的制備:將抗原免疫動(dòng)物(常用的動(dòng)物為兔、羊、狗等),分離出抗血清并純化抗體。多克隆抗體的均一性較差,其特異性相對較低,因此,多克隆抗體在農(nóng)藥殘留速測技術(shù)中的應(yīng)用受到一定的限制。但近年來有學(xué)者恰恰利用了多抗的交叉反應(yīng)高的特點(diǎn),通過制備出具有某類(或某幾種)農(nóng)藥的“共性結(jié)構(gòu)"的半抗原或者通過制備出含多個(gè)抗原決定簇的人工抗原來制備“寬譜特異性"抗體,進(jìn)行農(nóng)藥多殘留分析研究。

      2、單克隆抗體的制備:

      單克隆抗體制備技術(shù)最初是由K鰄ler和Milstein(1975)利用B淋巴細(xì)胞雜交瘤技術(shù)創(chuàng)立的。目前該技術(shù)已廣泛應(yīng)用于疾病診斷及生物、醫(yī)學(xué)研究、環(huán)境和食品安全檢測(監(jiān)測)等方面。單抗均一性高,只和抗原某一決定簇結(jié)合,有更高的特異性,而且,產(chǎn)生抗體的單克隆細(xì)胞可在體外傳代繁殖,不受動(dòng)物免疫時(shí)間限制生產(chǎn)抗體。只要管理和培養(yǎng)技術(shù)正確,抗體就可無限的產(chǎn)生?;具^程是動(dòng)物免疫、細(xì)胞融合、克隆篩選、單克隆抗體性質(zhì)鑒定、腹水誘發(fā)、收集和純化等。

      3、重組抗體的制備:

      近年來,隨著蛋白質(zhì)技術(shù)及DNA重組技術(shù)的發(fā)展,人們通過對抗體產(chǎn)生的基因本質(zhì)、基因重組抗體篩選技術(shù)和直接定位誘導(dǎo)基因操縱技術(shù)的研究,獲得用于zhi定空間位置并具有各種特異性、親和性,能忍受一定溫度、pH和有機(jī)溶劑的人工重組抗體。一般是將抗原免疫小鼠,一定時(shí)間后無菌條件下取出小鼠脾臟,提取脾細(xì)胞總RNA,以RNA逆轉(zhuǎn)錄合成的cDNA為模板,PCR擴(kuò)增抗體,將抗體中的輕鏈、重鏈連接成ScFv(single-chainvariablefragment)。酶切經(jīng)PCR擴(kuò)增的ScFv片段,并與噬菌體載體連接,然后以常規(guī)方法轉(zhuǎn)化入大腸桿菌或其他生物體中。人工培養(yǎng)帶有噬菌體抗體的大腸桿菌,即得到重組抗體。該方法生產(chǎn)抗體速度快,可通過誘變改變抗體特性,使抗體的特異性更強(qiáng),而且,利用這項(xiàng)技術(shù)獲得的噬菌體抗體庫,能同時(shí)識別多種農(nóng)藥,可用于農(nóng)藥多殘留免疫速測技術(shù)的研究。


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