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豬轉(zhuǎn)鐵蛋白(TF)elisa檢測(cè)試劑盒操作流程
  • 發(fā)布日期:2019-09-20      瀏覽次數(shù):966
    •                 豬轉(zhuǎn)鐵蛋白(TF)elisa檢測(cè)試劑盒操作流程

      樹(shù)林間積著半尺深的枯葉,風(fēng)一吹,旋轉(zhuǎn)著飛揚(yáng)起來(lái),又均勻地鋪散下去,掩蓋了那一條傾斜著盤(pán)旋到山頂?shù)男?。接下?lái)介紹  豬轉(zhuǎn)鐵蛋白(TF)elisa檢測(cè)試劑盒操作流程

      樣品收集、處理及保存方法:

      1)血清-----操作過(guò)程中避免任何細(xì)胞刺激。使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管。收集血液后,10×g離心10分鐘將血清和紅細(xì)胞迅速小心地分離。

      2)血漿-----EDTA、檸檬酸鹽、肝素血漿可用于檢測(cè)。1000×g離心30分鐘去除顆粒。

      3)細(xì)胞上清液---1000×g離心10分鐘去除顆粒和聚合物。

      4)組織勻漿-----將組織加入適量生理鹽水搗碎。1000×g離心10分鐘,取上清液

      5)保存------如果樣品不立即使用,應(yīng)將其分成小部分-70 ℃保存,避免反復(fù)冷凍。盡可能

      不要使用溶血或高血脂血。如果血清中大量顆粒,檢測(cè)前先離心或過(guò)濾。不要在37℃或更高的溫度加熱解凍。應(yīng)在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。

       

      操作步驟:

      實(shí)驗(yàn)開(kāi)始前,各試劑均應(yīng)平衡至室溫,試劑不能直接在37℃溶解;試劑或樣品配制時(shí),均需充分混勻,混勻時(shí)盡量避免起泡。實(shí)驗(yàn)前應(yīng)樣品含量,如樣品濃度過(guò)高時(shí),應(yīng)對(duì)樣品進(jìn)行稀釋,以使稀釋后的樣品符合試劑盒的檢測(cè)范圍,計(jì)算時(shí)再乘以相應(yīng)的稀釋倍數(shù)。

      1、加樣:分別設(shè)空白孔(空白對(duì)照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑,其余各步操作相同)、標(biāo)準(zhǔn)孔、待測(cè)樣品孔。在酶標(biāo)包被板上標(biāo)準(zhǔn)品準(zhǔn)確加樣50?l,待測(cè)樣品孔中先加樣品稀釋液40?l,然后再加待測(cè)樣品10?l(樣品zui終稀釋度為5倍)。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動(dòng)混勻。

      2、溫育:用封板膜封板后置 37℃溫育30分鐘。

      3、配液:將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用

      4、洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置30秒后棄去,如此重復(fù)5次,拍干。

      5、加酶:每孔加入酶標(biāo)試劑50?l,空白孔除外。

      6、顯色:每孔先加入顯色劑A50?l,再加入顯色劑B50?l,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色10 分鐘.

      7、終止:每孔加終止液50ml,終止反應(yīng)(此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色)。

      8、測(cè)定:以空白空調(diào)零,450nm波長(zhǎng)依序測(cè)量各孔的吸光度(OD值)。測(cè)定應(yīng)在加終止液后15分鐘以內(nèi)進(jìn)行。

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