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PCR檢測(cè)試劑盒?PCR反應(yīng)引物設(shè)計(jì)原則
  • 發(fā)布日期:2025-02-17      瀏覽次數(shù):46
    • PCR檢測(cè)試劑盒PCR反應(yīng)引物設(shè)計(jì)原則:
      PCR反應(yīng)中有兩條引物,即5′端引物和3′引物。設(shè)計(jì)引物時(shí)以一條DNA單鏈為基準(zhǔn)(常以信息鏈為基準(zhǔn)),5′端引物與位于待擴(kuò)增片段5′端上的一小段DNA序列相同;3′端引物與位于待擴(kuò)增片段3′端的一小段DNA序列互補(bǔ)。PCR檢測(cè)試劑盒PCR反應(yīng)引物設(shè)計(jì)的基本原則如下:
      (1)  引物長(zhǎng)度:15-30 bp,常用為20 bp左右。
      (2) 引物堿基:G+C含量以40-60%為宜,G+C太少擴(kuò)增效果不佳,G+C 過多易出現(xiàn)非特異條帶。ATGC最好隨機(jī)分布,避免5個(gè)以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
      (3) 引物內(nèi)部不應(yīng)出現(xiàn)互補(bǔ)序列。

      (4)兩個(gè)引物之間不應(yīng)存在互補(bǔ)序列,尤其是避免3 ′端的互補(bǔ)重疊。

      (5) 引物與非特異擴(kuò)增區(qū)的序列的同源性不要超過70%,引物3′末端連續(xù)8個(gè)堿基在待擴(kuò)增區(qū)以外不能有全互補(bǔ)序列,否則易導(dǎo)致非特異性擴(kuò)增。

      (6)引物3‘端的堿基,特別是最末及倒數(shù)第二個(gè)堿基,應(yīng)嚴(yán)格要求配對(duì),選擇是G和C。
      (7) 引物的5 ′端可以修飾。如附加限制酶位點(diǎn),引入突變位點(diǎn),用生物su、熒光物質(zhì)、di 高辛標(biāo)記,加入其它短序列,包括起始密碼子、終止密碼子等。


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